产品名称:Super Fluor 647(效果同Alexa Fluor 647)琥珀酰亚胺酯
英文名称:Super Fluor 647, SE
产品价格:
订货号
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英文名称
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中文名称
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包装
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价格
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PM300043
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Super Fluor 647, SE
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Super Fluor 647(效果同Alexa Fluor 647)琥珀酰亚胺酯
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1 mg
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¥2,400
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PM300043
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Super Fluor 647, SE
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Super Fluor 647(效果同Alexa Fluor 647)琥珀酰亚胺酯
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5 mg
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¥4,680
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产品简介:
Super Fluor活化酯(与Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同):
产品名称
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Ex(nm)
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Em(nm)
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产品描述
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Super Fluor 488, SE
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494
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518
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FITC的升级产品
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Super Fluor 555, SE
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556
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567
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Cy3, SE的升级产品
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Super Fluor 647, SE
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651
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668
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Cy5, SE的升级产品
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Super Fluor 680, SE
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680
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702
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Cy5.5, SE的升级产品
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Super Fluor 750, SE
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750
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775
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Cy7, SE的升级产品
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Super Flour 系列荧光探针,具有更强的荧光强度,更广的pH应用范围(pH 4~10), 更好的抗淬灭性。在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。
常见问题:
1.标记效率低——计算结果显示每摩尔145,000 MW 的蛋白标记的荧光团少于4mol
有以下原因:
1)缓冲液中含有痕量伯铵成分,与染料反应降低了标记效率。如果蛋白已经溶于含氨基的缓冲液(如Tris或氨基乙酸),标记前用PBS透析。
2)蛋白含量较低 (≤1 mg/mL)会影响标记效率。
3)标记步骤中加入碳酸氢钠的作用是将反应混合物的pH升高至~8,因为在弱碱性环境中标记反应的效率*。如果蛋白溶液的缓冲范围在低pH,加入重碳酸盐也无法将pH调节至*适水平。要么加大重碳酸盐的量,要么将缓冲液换成PBS,或用0.1 M碳酸氢钠透析等。
4)研究显示pH升至9.0~9.4,标记效率和标记速度(只需10min)明显改善。
5)不同抗体与荧光团的反应速率不同,染料标记后保留的生物活性程度也不同,因此标准步骤也不是总有*的标记结果。为增加标记率,可以对同一样品进行再标记,或减少蛋白的量加大染料的量重新标记。有研究者在室温孵育1小时后再4℃孵育过夜,情况有所改善。
2.过标记——计算结果显示每摩尔145,000 MW 的蛋白标记的荧光团大于10mol。虽然过标
记的蛋白也可以使用,但可能会引起蛋白的聚集、降低抗体结合抗原的特异性,这些都会造成非特异性结合。过标记还会引起荧光淬灭。可以增加蛋白或减少反应时间。
3.未结合染料难以去除——尽管大部分时候用分离柱可以较好的纯化蛋白偶联物,但仍可能会有痕量的游离染料留在偶联物溶液中,会使标记计算的值偏高??捎梅掷胫俅畏掷牖蛲肝鋈コ?。
4.蛋白或蛋白偶联物无法洗脱——不要再加缓冲液,只需再次离心一次或几次。